离子交换层析的基本原理:
离子交换层析是通过带电的溶质分子与离子交换层析介质中可交换离子进行交换而达到分离纯化的方法,也可以认为是蛋白质分子中带电的氨基酸与带相反电荷的介质的骨架相互作用而达到分离纯化的方法。 离子交换层析法主要依赖电荷间的相互作用,利用带电分子中电荷的微小差异而进行分离,钢衬四氟离子交换柱销售,具有较高的分离容量。几乎所有的生物大分子都是极性的,都可使其带电,所以离子交换层析法已广泛用于生物大分子的分离、中等纯化及精制的各个步骤中。
由于离子交换层析法分辨率高,工作容量大,并容易操作,因此它不但在医药、化工、食品等领域成为独立的操作单元,也已成为蛋白质、多肽、核酸及大部分发酵产物分离纯化的一种重要的方法。目前,钢衬四氟离子交换柱直销,在生化分离中约有75%的工艺采用离子交换层析法。
ProMoST网络工具。翻译后修饰(PTM)对蛋白的pI具有显着影响。大多数PTM发生在可电离侧链上,钢衬四氟离子交换柱,一些PTM如磷酸化或乙酰化引入新的可离子化的化学基团。如果您正在纯化可能进行翻译后修饰的真核生物蛋白,请使用ProMoST工具来计算和比较翻译后修饰对pI,分子质量和其他物理化学性质的影响。
记住,理论pI可能不同于真实的等电点,并且可能不反映蛋白表面上的实际电荷分布。电荷分布不均匀,并且一种蛋白在表面上既有正电荷,又有负电荷。当研究新的蛋白时,我总是筛选一系列阳离子和阴离子交换剂,弱和强,以优化纯化步骤。